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Prüfvorschrift
Coenzym
Q-10 Wirkstoff in Kapseln
Die Prüfvorschrift
"Coenzym Q-10 MSE" dient zur Identifikation und Spezifikation
von Q-10 Wirkstoff und zur Freigabe und Stabilitätsuntersuchung von
"Coenzym Q-10-Kapseln".
1. Der
Wirkstoff
Der Wirkstoff
Q-10 enthält 97-102% Coenzym Q-10 des deklarierten Gehaltes.
1.1.
Beschreibung
Q-10 erscheint
als gelb-oranges kristallines Pulver, es ist geruchlos und geschmacklos.
Es ist stark lipophil und daher leicht löslich in Chloroform, Benzol
und in Tetrachlorkohlenstoff. Es ist löslich in Aceton und in Äther,
schwerlöslich in Äthanol und praktisch unlöslich in Methanol
und Wasser.
Durch Licht
verfärbt es sich und zerfällt allmählich.
Der
Schmelzpunkt liegt zwischen 48 und 52°C.
Der
Trocknungsverlust beträgt <0,02%
Der Verbrennungsrückstand ist <0,01%
Ubichinon.Homologe
wie Q9 <0,30%.
1.2.
Identifikation des Wirkstoffes Q-10
- 0,05g
Q-10 werden in 1ml Äthyläther gelöst. Es werden 10ml
Äthanol zugemischt. Nach Zugabe von 0,1g Natriumborhydrid und 0,5ml
Wasser wird geschüttelt: die Lösung verliert die gelbe Farbe.
- 5mg Q-10
werden in 0,5ml Äther gelöst. Es werden 5ml Äthanol zugemischt.
Nach Zugabe von 2ml Äthylcyanoacetat und 1ml Kaliumhydroxidlösung
(1’5) wird geschüttelt: die Lösung wird erst blau und
wechselt dann zu grün.
- Im UV-Spektrum
weist Q-10 ein Maximum bei 274-276 nm und bei 289-291 nm auf.
- Die Identität
wird auch über die HPLC-Retentionszeit belegt.
1.3.
Wirkstoffgehalt und Reinheit 1.3.1.
DC-Methode I
Testlösung:
0,1g Q-10 werden in 20ml n-Hexan gelöst.
DC-Platte:
Silica Gel
Fließmittel:
Benzol/Chloroform (1:1)
Auftrag:
5 µl Testlösung
Laufstrecke:
10 cm
Lufttrocknung:
Entwicklung:
mit Schwefelsäure besprühen und 15min bei 105°C trocknen.
Ein einziger
dunkler Fleck bildet sich.
1.3.2. DC-Methode
II
Testlösung:
0,10g Q-10 wird in 20ml n-Hexan gelöst.
Fließmittel:
Aceton/Wasser (95/5)
DC-Platten:
Paraffin-gecoated Silica Gel
Silica Gel
Platten (250 µ; 20x20cm) werden eine Stunde bei 150°C getrocknet.
Die DC-Platten
werden für 3 Minuten in eine Lösung von flüssigem Paraffin
in Petroliumäther (5’100) getaucht und luftgetrocknet.
Auftrag: 10
µl Testlösung
Laufstrecke:
14 cm
Lufttrocknung:
Entwicklung:
die Platte wird zunächst mit einer äthanolischen Lösung
von Ferrichlorid (FeCl3) (1›500) und dann mit einer äthanolischen
Lösung von alpha,alpha'-Dipyridil (1>200) besprüht.
Nach etwa
einer Minute wird ein einziger gelber Fleck beobachtet.
1.3.3 DC-Methode
III
Silica Gel:
G F 254
Fließmittel:
Benzol/Aceton : 99,5/0,5
Aufnahme:
in Äthanol
Interner
Standard: Q8; Q9; Q10- 0,5 µg/100
µl Äthanol
1.3.4. Wirkstoffgehaltsbestimmung
über HPLC
1.3.4.1 HPLC-Methode
I
Testlösung:
30mg Q-10 oder Q9 werden in Dioxan gelöst.
HPLC-Bedingung:
Gerät:
Hitachi 635
Säule:
RP 18 Lichrosorb (E.Merck),
Bodenzahl >160, 150x4 mm, Stahl
Mobile
Phase: Dioxane/Wasser (88:12)
Die Peakhöhe
von Q-10 auf dem Chromatogramm wird auf 80-100% der gesamten Skala eingestellt.
Q-9 weist
eine relative Retentionszeit von 0,79 der von Q-10 auf. Der Q-9 Gehalt
in dem Wirkstoff beträgt nie mehr als 2% eher unter 0,3% und wird
nach folgender Gleichung berechnet, in die die Gewichte der entsprechenden
Chromatographie-Peaks P9 und P10 einsetzt werden.
1.3.4.2.
HPLC-Methode II (für Q-10 MSE Kapseln)
Standardlösung:
etwa 30mg Q-10 werden genau eingewogen und in 50ml Acetonitril gelöst.
Die Lösung wird filtriert. Untersuchungslösung: Der Kapselinhalt
einer Q-10 Kapsel (durchschnittliches Füllgewicht von 153mg) wird
in 50ml Acetonitril gelöst. Die Lösung filtriert.
HPLC-Bedingungen:
Gerät:
Hewlett Packard 1084 B Liquid Chromatograph
Säule:
RP 8, 5 µm, Nucleosil 200/8/4
Mobile
Phase: 100% Methanol
Flußrate:
1,4 ml/min
Injektionsvolumen:
5,0 µl
Ofensystem:
40°C
Detektion:
268 nm UV
Vergleichswellenlänge:
500 nm
Attenuation:
28
Zero:
10
Vorschub:
0,5 mm/min
Slope
Sensitivity: 0,3
1.3.4.3.
HPLC-Methode III (zur Extraktion)
nach G.P.Littarru
Extraktion:
2 x mit n-Hexan
Eintrocknen:
mit Stickstoff
Aufnahme:
in Äthanol
Säule
ODS, 250x5 mm
Mobile
Phase: Äthanol/Methanol (60/40)
Flußrate:
1 ml/min
Injektionsvolumen:
20 µl äthanolische Lösung
Detektion:
UV 280nm
Interner
Standard: Q8 oder Q9-0,5 g/100 µl Äthanol
1.3.4.4.
HPLC Methode IV
nach T.Kishi
Extraktion:
2 x mit n-Hexan
Eintrocknen:
Vakuum
Aufnahme:
in Äthanol
Säulen
und Fließmittel (austauschbar):
a) Perkin
Elmer HC-ODS SIL-X-1, Acetonitril/iso-Octan (95 : 5), 1 ml/min
b) Permaphase
ODS 1000 x 2,1 mm, Methanol/Wasser (95 : 5), 0,7 ml/min
c) Zorbax
ODS 250 x 4,6 mm Äthanol/Wasser (99:1), 1 ml/min
Injektionsvolumen:
10 µl äthanolische Lösung
Detektor:
UV 275 nm
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